原來(lái)這才是熒光檢測(cè)器原理問(wèn)題的實(shí)質(zhì)！
2021-04-21
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熒光檢測(cè)器是一種檢測(cè)器，靈敏度在目前常用的HPLC檢測(cè)器中較高，在HPLC中應(yīng)用較多。僅次于紫外吸收檢測(cè)器。它用于能激發(fā)熒光的化合物。
熒光檢測(cè)器的工作原理是：
用紫外光照射某些化合物時(shí)它們可受激發(fā)而發(fā)出熒光，測(cè)定發(fā)出的熒光能量即可定量。很多與生命科學(xué)有關(guān)的物質(zhì)，如氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝藥物都可以用熒光法檢測(cè)。熒光檢測(cè)器在生物樣品痕量分析中很有用，尤其在用熒光衍生劑后，可以檢測(cè)很微量的氨基酸和肽。
熒光檢測(cè)器的優(yōu)勢(shì)：
靈敏度*。熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器的靈敏度約高兩個(gè)數(shù)量級(jí)，較小檢測(cè)量可達(dá)10^(-13g)。這是因?yàn)樵谧贤馕諜z測(cè)法中，被檢測(cè)的信號(hào)A=lg(Io/I)，即當(dāng)樣品濃度很低時(shí)，檢測(cè)器所檢測(cè)的是兩個(gè)較大信號(hào)Io及I的微小差別；而在熒光檢測(cè)法中，被檢測(cè)的是疊加在很小背景上的熒光強(qiáng)度。熒光檢測(cè)器是較靈敏的液相色譜檢測(cè)器，特別適合于痕量分析。愈是常用的衡量檢測(cè)器靈敏度的基準(zhǔn)物質(zhì)。另外，熒光檢測(cè)器的靈敏度還可以用水的拉曼譜帶的信噪比來(lái)衡量。
良好的選擇性。產(chǎn)生熒光的一個(gè)必要條件是該物質(zhì)的分子具有能吸收激發(fā)光能量的吸收帶，即物質(zhì)分子具有一定的吸收結(jié)構(gòu)；另外的條件是吸收了激發(fā)光能量之后的分子具有高的熒光效率。相對(duì)較少的分子具有大的足夠檢測(cè)的量子效率是熒光檢測(cè)器高選擇性的主要原因。在很多情況下，熒光檢測(cè)器的高選擇性能夠避免不發(fā)熒光的成分的干擾，成為熒光檢測(cè)的*優(yōu)點(diǎn)。圖4-5-12, 中雖然紫外# 可見(jiàn)光檢測(cè)器在265nm可以檢測(cè)牛奶中的維生素B2，但卻取激發(fā)波長(zhǎng)265nm，發(fā)射波長(zhǎng)520nm做熒光檢測(cè)。因?yàn)榛w成分在此條件下不存在干擾熒光，具有更準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。
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